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詳細(xì)介紹酶標(biāo)儀酶免分析七大步驟
更新時(shí)間:2016-04-27   點(diǎn)擊次數(shù):2157次
酶標(biāo)儀是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的儀器又稱微孔板檢測(cè)器??珊?jiǎn)單地分為半自動(dòng)和全自動(dòng)2大類,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一個(gè)比色計(jì),即用比色法來(lái)進(jìn)行分析。 測(cè)定一般要求測(cè)試液的終體積在250μL以下,用一般光電比色計(jì)無(wú)法完成測(cè)試,因此對(duì)酶標(biāo)儀中的光電比色計(jì)有特殊要求。
1 、將標(biāo)準(zhǔn)品和樣品對(duì)應(yīng)的微孔編號(hào),每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品做雙孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置。
2 、在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入 50µl 各標(biāo)準(zhǔn)品溶液,酶標(biāo)儀在各樣品孔中加入 50µl 樣品溶液。
3 、在所有孔中加入 50µl 的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩混勻, 25 ℃環(huán)境中避光反應(yīng) 30 分鐘。
4 、小心揭開蓋板膜,甩干孔中液體,用稀釋好的洗滌液( 250μl/ 孔)充分洗滌微孔板 3 次,在吸水紙上拍干(拍干后未清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破)。
5 、酶標(biāo)儀在所有孔中加入 100µl 的酶標(biāo)二抗,酶標(biāo)儀用蓋板膜封板,輕輕振蕩混勻, 25 ℃環(huán)境中避光反應(yīng) 30 分鐘。取出酶標(biāo)板,按步驟 4 洗板 5 次。
6 、洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個(gè)微孔中先加入 50µl 底物液 A ,再加 50µl 底物液 B ,輕微晃動(dòng)反應(yīng)板使之*混勻, 25 ℃環(huán)境避光顯色 15 分鐘 ( 在顏色淺的情況下可適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間,但總顯色時(shí)間不要超過 30 分鐘 ) 。
7 、每孔中加入 50µl 終止液,輕輕晃動(dòng)使之*混勻,在 450nm (建議使用雙波長(zhǎng) 450/630nm )下檢測(cè)吸光度,結(jié)果在 5 分鐘內(nèi)讀取。

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